妥妥干货：细胞凋亡操作必备

  细胞凋亡细胞凋亡（Apoptosis）的检测可从 形态学、细胞膜、DNA、线粒体、Caspase 级联、蛋白表达 六个层面进行，常用的是流式细胞术和TUNEL染色

流式细胞术（Annexin V-FITC/PI 双染）

操作步骤：

收集处理后的细胞（包括悬浮细胞），PBS 洗涤 2–3 次。

用 1× Binding Buffer 重悬细胞，调整密度至 1×10⁶ 个/mL。

加入 5 μL Annexin V-FITC 和 5–10 μL PI，室温避光孵育 15 min。

流式细胞仪检测，1 h 内完成上机。

结果判读：

右下象限（Annexin V⁺/PI⁻）：早期凋亡

右上象限（Annexin V⁺/PI⁺）：晚期凋亡/坏死

模型组总凋亡率通常较对照组升高 2–3 倍（如从 ~10% 升至 ~30–50%）。

组织消化酶（启达生物，货号：SD0013)                细胞消化液（启达生物，货号：SD0003)

2. TUNEL 染色

操作步骤：

细胞接种于铺有细胞玻片的 24 孔板中。

4% 多聚甲醛室温固定 30 min。

滴加 TUNEL 染色液，室温避光孵育 1 h。

DAPI 封片，激光共聚焦显微镜观察并拍照。

判定：模型组可见明显绿色荧光（TUNEL 阳性），对照组几乎无信号。

3. Caspase-3 活性检测

化学比色法：按试剂盒检测 Caspase-3 活性，模型组显著升高。

Western blot：检测 Cleaved Caspase-3 和 Cleaved PARP 蛋白表达