PBMC细胞提取怎么操作 ？看看这篇分享

       外周血单个核细胞（Peripheral  Blood  Mononuclear  Cell，简称PBMC）是存在于人体外周血液中的一种具有单个核的细胞类型。它们在免疫系统中发挥着至关重要的作用，主要包括淋巴细胞（Lymphocyte）、单核细胞（Monocyte）、树突状细胞（DC）等，同时还包括其他少量细胞。

一、准备材料：

在进行PBMC提取之前，需要准备以下材料：

1.人全血；

2.15ml离心管；

3.DPBS；

4.PBMC细胞分离液（启达生物，catlog:SD0060）；

5.PBMC无血清细胞培养基(启达生物，Catlog：P1901）。

二、PBMC细胞提取步骤：

1. 将 10ml 全血转入 50ml 离心管中，加入 10ml PBS 溶液稀释，轻轻混匀；

2. 取两支 15ml 离心管，先加入 5ml 淋巴细胞分离液。然后将稀释的血液轻轻加到两支离心管的立板细胞分离液的上层，一定要轻柔，避免两种溶液混合在一起，每只离心管各 10ml 稀释血液； 

3. 2,000rpm，20min，注意，降速设置中一定要设置成 no break，或者只有 1-2 成的制动。离心完毕将得到如图所示分层； 

4. PBMC 所在细胞层为白色。此时可以用吸管将该层细胞吸取在另一干净的 15ml 离心管中。

5. 加入 PBS 至 10-15ml，1,500rpm，10min 离心后去掉上清，再加入培养基进行相同操作的清洗；

6. 加入 5-10ml 培养基重悬细胞，进行后续计数培养或者铺板。

若实验需要的细胞量较少， 可以把多余的细胞冻存，按照原代细胞冻存步骤冻存即可。

三、分离PBMC细胞需要注意的事项：

1. 每毫升外周血液大约可获 1×106 单个核细胞；

2. Ficoll 应适量，外周血应充分稀释，温度直接影响到 Ficoll 的比重和分离效果；

3. 在 Ficoll 上加入稀释外周血时，应缓慢加，以免冲散界面；

4. 吸取单个核细胞层时，应避免吸出过多的上清液或分层液而导致血小板污染。

在进行PBMC细胞分离时，我们需要关注以上四个方面：细胞数量的估算、Ficoll和外周血的配比、温度控制、以及吸取细胞时的操作技巧。只有做到这四点，我们才能确保实验的顺利进行，获得准确的实验结果。