细胞活性检测之XTT法操作步骤

细胞活性检测除了CCK8和MTT外还有一个XTT检测方法哦！

细胞活性检测XTT法是一种检测细胞增殖和活性的方法。其检测原理是：XTT是一种与MTT类似的四唑氮衍生物，可被活细胞线粒体脱氢酶还原成水溶性的棕色甲肷产物。当XTT与电子耦合共同使用时，甲肷的生成量与细胞的增殖程度呈正相关。

在细胞活性检测实验中，将XTT试剂和电子偶联试剂按一定比例混合后，加入到待测细胞中，然后进行孵育。在孵育过程中，活细胞会将XTT试剂还原成甲肷产物，而死细胞则无法进行这种还原反应。通过检测甲肷产物的生成量，可以判断细胞的增殖程度和细胞活力。

使用XTT法进行细胞活性检测具有操作简便、灵敏度高、重复性好等优点。同时，该方法对细胞毒性低，适用于各类哺乳动物细胞活性的检测。

试剂与材料：

（1） XTT：用60℃预热培养液配制成6.6mmol/L，过滤除菌，现配现用； 

（2） 吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）：用PBS配制成220mmol/L，4℃避光保存20天； 

（3） XTT/PMS：XTT与PMS按1：1混合（临用时混合）。

XTT法操作步骤：

（1）刺激增殖反应，按照一定比例将XTT试剂与电子耦合试剂混合，加入到细胞培养液中，继续培养一定时间；

（2） 于终止培养前2h，每孔加入XTT/PMS 20μl，混匀后再培养2h； 

（3） 在酶标仪上450nm处测定光吸光度，参考波长为655nm。 

【结果分析】 

计算SI：SI＝试验孔OD均值/对照孔OD均值 

XTT法操作注意事项：

（1）丝裂原的质量和活性是测定淋巴细胞增殖反应的关键因素。不同厂家的产品，质量、活性不同，其使用的最佳刺激量也不同，因而在实验前，应事先确定其最佳刺激量。 

（2） 检测T细胞增殖反应，丝裂原用PHA或ConA；B细胞增殖反应用LPS或SPA；T、B细胞增殖反应则用PWM。 

（3） 增殖反应的细胞应保持高活性，一般应≥95％。应用单抗分离制备的反应细胞因保存剂（如NaN3）或抗体的直接作用可抑制细胞的增殖。此外，增殖细胞的浓度过高或过低均不利于细胞生长。 

（4） 细胞培养液应无菌、无支原体污染，特别是小牛血清应加热灭活补体，避免LPS或其他能促进细胞增殖物的污染。因此，实验前应选择本底低的小牛血清。用人"AB"型血清或自体血清也应加热灭活补体。