血管形成实验容易出现的BUG

    血管生长是肿瘤发生的关键步骤。通过抑制肿瘤血管生成来阻止肿瘤发展和转移合乎逻辑。

    血管生成(angiogenesis)是生殖、生长发育和修复的基础。肿瘤无新生血管时,直径很少超过2 mm-3 mm,其生长处于休眠状态。当肿瘤原发灶或转移灶长大到一定程度,氧及营养供应和代谢产物的排出就出现不足。一旦血管长入肿瘤,供给肿瘤组织营养和氧的方式由周边弥散变成血液灌注,其代谢产物也能在血液循环时彻底清除。肿瘤血管不仅为肿瘤提供营养和氧,运走代谢产物,还决定肿瘤的病理生理、生长、侵袭、转移和对各种治疗的反应 。该观点于1971年经Folkman梳理,加之随后血管生长因子被发现,这个问题受到学术界极大重视,相关药物研究也随之蓬勃发展。

      肿瘤血管生成包括了以下五种方式 。血管生成 (angiogenesis)即肿瘤组织在原有微血管网的基础上通 过“芽生”方式形成新血管;血管发生(vasculogenesis) 即血液或骨髓来源的内皮祖细胞形成新血管;血管套叠 (intussusception)即间质组织掺入到已有的血管参与肿瘤血管的构成;马赛克血管(mosaic vessel)即内皮细胞和分散的肿瘤细胞本身相间排列组成血管;血管生成拟态(vasculogenic mimicry)即肿瘤细胞模拟并取代内皮细胞形成管腔样结构。 

    体外的血管形成实验成为研究的热点，目前血管形成实验一般都采用内皮细胞结合条件培养基或结合肿瘤细胞并接种于基底上就形成了三维网状结构，观察其形成的结构，之后通过各种软件进行定量分析。目前做的比较多的是内皮的小管形成。

    1. 内皮的代数不能太多，若是HUVEC ，HMEC-1等细胞系去做此类的实验，建议细胞的代次控制在7代内，若细胞形态不好，与铺板成管的关系会很大，所以在做实验时，一定要在细胞具有最佳生长状态，最佳形态，并且无任何污染的情况下铺板，细胞尽量铺匀，要不然做出来的小管可能会存在断点。

    2. 原代内皮细胞做小管实验，因为内皮细胞分离并不是想象中的剥下来就是内皮的那么简单，比如Cell Systems的原代细胞分离的标准就有很具体的说明，细胞在P0的时候，基本是有杂质的，然后需要进行磁珠筛选或者酶消化一次，（cell systems的细胞为了让科研用户的实验更不受抗体影响，一般不采用抗体筛选，这样原代细胞在纯化之后不会带任何抗性，影响实验最终的结果）所以原代的内皮在做小管实验的时候尽量控制传代的次数，最好做一个传代的极限测试，然后再根据结果复苏细胞进行实验。

    3. 铺板基质胶的时候一定要注意：感觉这个玩意一定要好的品牌，好的品牌还挺贵的，所以不能浪费，铺胶前可以用无血清的培养基先稀释，一般是1：2左右；（建议不稀释用的心痛，稀释太大怕成不了管的心理的同学可以尝试一下）胶一个96 孔板一般是50ul左右，土豪可以试试24孔板铺胶，相比下来面积更大，拍照的地儿也多，可以各种POSE摆起来，大佬可以试试血管生成的培养皿，这玩意简单省事，直接把细胞往上一盖，坐等美图自动生成。

需要注意的点：配制试剂时，不要产生气泡；加细胞悬液时，不要让枪头触碰基质胶，

   4. 铺细胞的密度要控制好，状态和密度息息相关，若当心细胞不成管可以给它来点生长因子如EGF,VEGF等。

    5. 拍照的时间一定要掌握好，千万不能睡过头，一般内皮细胞在铺板后12小时开始成管，24小时后开始崩解；