收藏起来：LUC标记的小动物成像轻松做！

问：LUC标记细胞小动物成瘤后检测底物需要注射到肿瘤部位吗?

答：在活体生物发光成像（BLI）中，D-荧光素（luciferin）经腹腔（IP）或皮下（SC）注射后即可通过血液循环到达全身各处，与已表达荧光素酶的肿瘤细胞反应，因此无需直接注射到肿瘤局部即可实现成像.

问：小动物成瘤后检测不到 LUC 荧光怎么办？

常见原因可按“表达-递送-反应-采集”四步排查,具体如下， 收藏起来，LUC标记的小动物实验轻松过关！

(一）表达环节

1. 荧光素酶（Luc）表达丢失：体外筛到的“阳性”克隆在体内传代或冻存后发生启动子甲基化、质粒丢失，导致实际表达量低于仪器检测限。

2. 免疫清除：在免疫健全小鼠中，Luc 作为外源蛋白可被 CD8⁺ T 细胞识别并杀伤高表达细胞，造成信号进行性下降甚至消失。

3. 启动子沉默：CMV 等病毒启动子易受 IFN-γ 等细胞因子影响而下调，尤其在炎症或坏

死区域

（二）底物递送环节

1. 底物量不足：腹腔注射剂量一般按 150 mg/kg 计算，若称重或稀释有误，或动物麻醉过深导致循环衰竭，底物难以到达肿瘤。

2. 给药途径不当：皮下/尾静脉注射时漏液，或肿瘤血供差（中心大面积坏死），局部底物浓度低于 Km 值。

3. 底物失效：D-荧光素反复冻融、室温放置 >2 h 会降解；粉末受潮也会失活。

 
(三）反应环境环节

1. 缺氧：肿瘤>8 mm 时中心常严重缺血缺氧，荧光素酶反应需 O₂ 和 ATP，缺氧区信号会显著减弱。

2. pH 过低：坏死核心区 pH<6.5 会抑制酶活。

3. 底物竞争/抑制：血中高浓度脂肪酸、抗生素（如四环素）或动物同时给予其他荧光试剂，可产生抑制或吸收。

(四）信号采集环节

1. 仪器参数设置：曝光时间过短（<1 s）、binning 值过低、光圈未全开都会漏掉弱信号；背景扣除阈值设得过高也会把真实信号“归零”。

2. 毛发/位置干扰：黑毛或金属耳标对 560 nm 光子吸收强；深部脏器（胰腺、颅内）未用 37 °C 预热台，也造成信号衰减。

3. 采集窗口错过：峰值一般在底物注射后 10–15 min（小鼠），若延迟到 30 min 以后，信号已下降 80% 以上。

LUC检测不到怎么办？
① 体外再测一次细胞 Luc 活性（加底物立即发光可排除表达问题）；
② 同批底物在已知阳性瘤小鼠上测试，可排除底物/仪器因素；
③ 取瘤体做 IHC 或 Western 确认 Luc 蛋白是否仍在；
④ 若怀疑免疫清除，可改用 Nude/NSG 小鼠或短暂免疫抑制（环孢素 3 d）再挑战。