悬浮细胞的MTT实验操作步骤及注意事项

悬浮细胞的MTT实验操作步骤及注意事项

操作步骤：

1. 将悬浮细胞培养至对数生长期，用PBS洗涤细胞，离心300g，5分钟。去除上清液，重新悬浮细胞至适当浓度（如1×10^5）

2. 接种细胞：用含10%细胞完全培养配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul。

3. 培养细胞：在37℃、5%CO2的条件下孵育16-48小时，然后在倒置显微镜下观察。

4. 呈色：取出96孔板，将每孔上清液抽出。每孔加入100ul的预先稀释好的MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），使细胞与mtt试剂充分接触后，继续培养4小时,使细胞代谢mtt，形成紫色结晶物;

5. 溶解结晶物：对于悬浮细胞，推荐跳过某些步骤并直接进行离心（1000转x10分钟），然后小心吸掉上清液。接着，每孔加入100ul的二甲基亚砜（DMSO），置摇床上低速振荡10分钟，使结晶物充分溶解。

6. 比色：在酶联免疫检查仪上，选择OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值。

Thp-1 cells Line（启达生物，catlog：CD0122)

K-562 cells Line（启达生物 catlog：CD0115)

注意事项：

6. 实验环境：确保实验在无菌、无尘、恒温（37℃）和恒湿的环境中进行，以维持细胞的最佳生长条件。

7. 溶解结晶物时应充分振荡，以确保完全溶解。

8.  细胞计数：在接种细胞时，确保准确计数，因为细胞数量直接影响实验结果。

9. MTT溶液：MTT溶液需现配现用，避免长时间储存导致活性降低。

10.  避免交叉污染：在操作过程中，注意更换吸头和管尖，避免不同孔之间的交叉污染。

11.  离心条件：在离心过程中，确保转速和时间设置正确，避免对细胞造成损伤。

12. DMSO操作：DMSO具有一定的毒性，操作时需佩戴防护眼镜和手套，确保安全。

8. 结果解读：OD值的变化反映了细胞的活性，但需注意排除其他可能干扰因素，如培养基的颜色、气泡等。

9. 实验记录：详细记录实验过程中的所有操作和环境条件，以便后续分析和复查。

以上步骤和注意事项完成后，可以确保实验的准确性和可靠性，从而得到准确的细胞活性数据。