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值得收藏:WB实验的缓冲液配方
来源:启达生物 浏览量:115 发布时间:2025-07-31
Western blot是一种常用的实验技术,用于检测和分析蛋白质的存在和表达水平。Western blot包括蛋白质提取、电泳分离、转膜、免疫染色等步骤。下面是一些常用的Western blot相关缓冲液(Buffer)配方。
RIPA缓冲液:
RIPA缓冲液是一种用于蛋白质提取的常用缓冲液,可以有效地裂解细胞膜并释放蛋白质。以下是一种常用的RIPA缓冲液配方:
-氯化钠(NaCl):150mM
- 三羟甲基氧甲烷(Tris) pH 7.4: 50 mM
-适量氢氧化钠(NaOH)调整pH值
- 二硫化苯甲醇(β-mercaptoethanol) 或 DTT:1%
- 甘油(glycerol):1%
-磷酸盐缓冲液:10mM
-磷酸二氢钾(KH2PO4):1.5mM
-多普酰转酶抑制剂(PMSF):1mM
-乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA):1mM
-硫酸镁(MgSO4):1mM
SDS-凝胶电泳缓冲液:
SDS-凝胶电泳是Western blot的重要步骤之一,SDS-凝胶电泳缓冲液配方:|
- Tris酸:25 mM
- 甘氨酸(Glycine):250 mM
-SDS:0.1%
-水:适量
转膜缓冲液:
转膜缓冲液用于将电泳分离得到的蛋白质转移到膜上进行进一步的分析。配方如下:
-二甲基亚砜(DMSO):20%
-甘氨酸:192mM
-氯酸钠(NaClO3):20mM
- Tris酸:25 mM
-水:适量
阻断缓冲液:
阻断缓冲液用于在免疫染色之前预防非特异性结合,配方如下:
-牛血清蛋白(BSA):3-5%
-牛血清白蛋白(BSA):0.1-0.3%
-磷酸盐缓冲液:10mM
- Triton X-100或Tween-20:0.1-0.5%
-NaN3:0.01-0.02%
抗体染色缓冲液如下配制:
-磷酸盐缓冲液:10mM
-硼酸:1mM
-EDTA:5mM
- Tween-20:0.1-0.2%
-低脂牛奶粉(非脂奶粉):5-10%
-NaN3:0.02%
备注:以上都是常规基本配方,可能需要根据实验的具体要求进行调整。不同实验室和研究人员可能会根据实际需要进行配方上的调整。
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