屏障功能检测不可缺少的TEER操作SOP

屏障功能检测不可缺少的TEER操作SOP

TEER（Trans-Epithelial/Endothelial Electrical Resistance，跨上皮/内皮电阻）实验是评估细胞单层屏障完整性、紧密连接形成及离子通透性的标准方法，广泛应用于血脑屏障(BBB实验）、肠道屏障、呼吸道上皮等模型。其操作原理是通过欧姆定律来检测细胞形成的屏障的完整性，电阻值越高，表明细胞间紧密连接越完整，屏障功能越强

TEER实验操作流程来啦

一、仪器准备：

上皮/内皮电压欧姆计：如 EVOM2/EVOM3（World Precision Instruments）、Millicell ERS 3.0 等

电极：

筷子电极（Chopstick electrodes）：手持式，适合快速筛查

腔室电极（EndOhm chamber）：测量更稳定、可重复性更高

Transwell 小室：常用 6.5 mm（膜面积 0.33 cm²）或 12 mm 规格，孔径 0.4 μm（需根据细胞类型选择）

无菌镊子

二、试剂准备

完全培养基（根据细胞类型配制）

无 Ca²⁺/Mg²⁺ 的 PBS（用于电极清洗）

胶原/基质胶/细胞包被液（用于贴壁不牢的细胞株及原代细胞）

三、小室初养成

1. 不同的细胞铺板的密度不一样，生长很慢的细胞和铺板贴壁不牢的细胞需要提高铺板密度 ，正常的细胞接种密度在1*10^5cells/ml左右即可。

2. 下室提前加入 1–1.5 mL 无细胞的完全培养基后再取1ml细胞悬液种于Transwell 小室上室；置于37°C、5% CO₂ 培养箱中培养

3. 待细胞形成紧密连接后，每1天测量一次直到电阻指数进入平台期

测量步骤：

·  将 Transwell 小室用无菌镊子转移至 EndOhm 腔室中

·  确保上下室液体体积一致，消除液面高度差引起的误差

·  按照仪器说明书测量电阻值

四、计算 TEER 值（单位面积电阻）

由于电阻与膜面积成反比，需将组织电阻乘以有效膜面积，标准化为 Ω·cm²：TEER=(Rtotal−Rblank)×A

其中：

A = Transwell 膜的有效面积（cm²）

比如：6.5 mm Corning Transwell：A=0.33 cm2

12 mm Transwell：A=1.12 cm2

五、部分细胞屏障形成时间

原代细胞（如原代脑微血管内皮细胞）：屏障形成更完整，但培养周期长（10–14 天或更长）若和周细胞共培养，一般5-10天即可形成完整屏障

永生化细胞系（如 bEnd.3、hCMEC/D3）：增殖快，通常 5–7 天 即可形成可检测屏障

iPSC 分化细胞：分化成熟需 10–21 天

Caco-2：≥300–500 Ω·cm²（通常需培养20天以上）

呼吸道上皮：>500 Ω·cm²，至少持续培养 12-15天

六、细节注意，一次成功：

温度需要控制好：温度每变化 1°C，电阻值可变化约 2–3%。建议所有样品在相同温度下测量，或进行温度校正

液体体积要平均：每次测量时上下室液体体积必须严格一致，液面高度差会导致系统误差；

电极位置要打底： 长电极必须触及培养板底部；短电极在上室。电极不可接触膜表面，避免刺破细胞层。

测量时机要选对： 避免在换液后立即测量，建议等待 30 分钟至 1 小时，使细胞状态稳定。

细胞汇合度要均匀： 接种时确保细胞均匀分布；若生长不均匀，会导致 TEER 值偏低且不稳定。转移培养板时需避免晃动。

电极维护要及时： 测量前后用 PBS 冲洗电极，避免盐结晶堵塞。定期用乙醇消毒

报告要用MIRTA 规范 ：发表时需报告设备型号、电极类型、校准方法、膜面积、培养基成分及测量温度等