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科研无小事(一)细胞的STR鉴定

来源:启达生物  浏览量:1736  发布时间:2020-10-20

    做实验的时候才发现细胞的种类太多,于是我们需要查询各种文献看每个细胞的特征,从而设计实验规划与步鄹,我们在紧凑的实验种完美了实验,提交文章的时候,才发现,需要细胞鉴定。

    据统计约30%细胞系被交叉污染或错误辨识,因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗灾难性后果……这浪费大量时间、精力和金钱。因此NIH、ATCC等权威机构多次发出呼吁,要求研究者对细胞进行鉴定,最近美媒报道1/6科学家在研究使用“假冒”细胞,2014年12月、2015年2月Science杂志分别发表文章专题阐述细胞交叉污染和错误辨识的严重性;2015年4月Nature通知:Nature旗下所有杂志将要求作者鉴定论文中所用细胞系;2015年6月即有报道称一科学家因用错细胞系,撤销Nature论文。NIH、ATCC、Nature和Science等机构对此多次发出呼吁,要求研究者对细胞进行鉴定,STR基因分型已被作为金标准应用于细胞系鉴定,越来越多杂志开始要求投稿人提供细胞STR鉴定结果。

    在2011年美国就已经颁布了细胞STR鉴定国家标准(ANSI/ATCC ASN-0002-2011)。目前STR检测已被广泛应用于亲子鉴定、个体识别、细胞来源判定等方面。ATCC、DSMZ、JCRB等国际知名细胞库已将STR基因分型列为细胞鉴定的金标准。

STR.jpg

    STR鉴定已经成为了细胞株的“身份证”能在科研界通行无阻,必须要有STR。那么动物源呢,因为建立的DNA条带并不完善,目前只有小鼠的部分细胞可以提供STR


STR鉴定描述

利用荧光标记扩增产物长度多态分析方法对细胞样本进行9个/16个STR位点进行分型。设计PCR引物,组成2个PANEL用于扩增多态位点。位点的荧光标记采用引物上标记5’FAM荧光标记。引物用在线Primer3 软件设计(http://frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3_www.cgi)。PCR产物稀释后取少量与内标标记混匀后直接上ABI 3130xl进行毛细管电泳,数据文件用GeneMapper4.0(Appliedbiosystems)来分析。

   STR(Short Tandem Repeat,短串联重复序列)是一类广泛存在于真核生物基因组中的DNA串联重复序列,由于其核心序列重复次数存在个体差异多态性,因此STR也被称为细胞的DNA指纹。


我们的收样和鉴定:

1.T25瓶活细胞和冻存管或将1×10的五次方以上细胞悬液置于1.5毫升EP管,用封口膜密封,做好标记并附送清单。

2.鉴定时间:2周内出结果,提供鉴定报告。


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